如何选择合适的流式抗体呢？

流式细胞术是一种在液流系统中，快速测定单个细胞或细胞器的生物学性质，并把特定的细胞或细胞器从群体中加以分类收集的技术。在细胞生物学、细胞凋亡研究和免疫学方面起着非常重要的作用。随着流式细胞术在不断发展，流式抗体及荧光标记产品的种类、数量也在不断增多，加上多色分析实验方案需求的增长，逐渐产生了抗体难选择、荧光难搭配等问题。那么如何选择合适的流式抗体呢？

1、抗体的选择

流式抗体本身也是抗体，所以选择流式抗体一定要满足抗体选择最基本的条件：目标蛋白特异性，反应种属以及应用实验。
（1）确定所需检测的指标，目的细胞的特异性表面标记或胞内标记；
（2）根据检测样本的种属选择抗体，流式抗体基本无法进行种属交叉反应；
（3）根据抗体的说明，明确是否可以用于流式实验。

2、确定仪器的参数配置

激光器：不同的流式细胞仪激光器不同，常见的有405nm，488nm和635nm，需要根据具体的仪器进行确定。
滤光片：检测通道的多少，决定最多可以同时检测几个指标。荧光素的发射波长与滤光片有关，所选择荧光素要在仪器的可检测范围内。
仪器：相同的荧光在不同的仪器上检测通道可能不同，需要参照仪器的说明。

3、流式荧光标记的选择

如果实验中检测单一指标：不同荧光标记在不同的仪器上强度不同。用户需根据检测的目标蛋白进行具体选择。
如果同时检测多个指标：确认流式细胞仪能检测多少个通道：流式抗体每个通道只能选择1种荧光素。各个通道之间的荧光素可以随意搭配。

4、同型对照的选择

流式细胞实验和其他抗体相关实验有点不同的就是需要选择同型对照。同型对照，是用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色，相当于实验的阴性对照。同型对照选择与标记抗体同种属来源，同亚型，同荧光标记的抗体。比如：抗人的CD3的PE标记的抗体，小鼠的IgG2a。同型对照选择PE标记的小鼠的IgG2a。
有时候同型对照的表达会比抗体的表达高，首先检查同型对照的抗体是否加错类型、剂量等。其次，因为有些标志在细胞的表面或者胞内表达不高，而跟其类似的抗原非常多，那么同型对照非特异性的结合会超过抗体的特异性，所以会造成这种现象。这个时候推荐使用其他阴性对照，如空白对照等。

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