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产品简介
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2020-02-282020-02-282021-11-082020-05-252026-03-03| 品牌 | 其他品牌 |
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一、代理介绍
农杆菌感受态制备试剂盒代理——北京百奥创新科技有限公司，提供多个品牌的农杆菌感受态制备试剂盒，更多产品的介绍，欢迎咨询！
二、产品介绍
技术代际 | 方法 | 转化效率 | 特点 |
Di一代（1980s） | 氯化钙化学法 | 10⁴–10⁵ CFU/μg | 操作简便，效率有限 |
第二代（1990s） | 电穿孔法 | 10⁶–10⁷ CFU/μg | 需要专用设备，细胞损伤大 |
第三代（2000s） | 液氮速冻/冻融法 | 10⁵–10⁶ CFU/μg | 适合大质粒，重复性挑战 |
第四代（2010s+） | 优化化学法+冻干保护 | 10⁷–10⁸ CFU/μg | 高活性、长期稳定、标准化 |
参数 | 规格 |
制备原理 | 低渗CaCl₂/MgCl₂处理+PEG辅助细胞膜重塑 |
适用菌株 | GV3101、EHA105、LBA4404、AGL1等常用根癌农杆菌 |
起始材料 | 新鲜过夜培养物或甘油保藏菌 |
制备规模 | 50 mL培养物→200管（50 μL/管）感受态 |
转化效率 | ≥1×10⁸ CFU/μg pCAMBIA1301质粒DNA |
有效期 | -80°C保存6个月，转化效率下降<20% |
试剂盒组成
组分 | 规格 | 功能 |
Solution I（洗涤缓冲液） | 100 mL | 低渗处理，去除培养基残留 |
Solution II（感受态缓冲液） | 50 mL | CaCl₂/MgCl₂/PEG zui-you化配方 |
Solution III（冻存保护液） | 25 mL | 含7.5% DMSO，玻璃化保护 |
阳性对照质粒 | 10 μL (50 ng/μL) | pCAMBIA1301（卡那+潮霉素抗性） |
使用说明书 | 1份 | 详细protocol与故障排除 |
关键步骤 | 技术细节 | 质控标准 |
菌体收集时机 | OD₆₀₀=0.4–0.6（对数早期） | 细胞活力zui-jia，细胞壁可塑性强 |
低温处理 | 全程0–4°C操作 | 抑制代谢，维持膜稳定性 |
渗透压梯度 | 逐步降低离子强度 | 避免渗透休克导致细胞裂解 |
DMSO处理 | 终浓度7.5%，分步加入 | 平衡细胞膜流动性与毒性 |
分装冻存 | 液氮速冻后-80°C保存 | 避免冰晶损伤，玻璃态固化 |
参数 | 规格 |
制备原理 | 高渗蔗糖/甘油洗涤+超纯水电渗透处理 |
适用菌株 | 农杆菌及难以制备感受态的革兰氏阴性菌 |
转化效率 | ≥5×10⁹ CFU/μg pCAMBIA1301（电转条件优化后） |
电转参数 | 2.0 kV, 25 μF, 200 Ω（0.2 cm电转杯） |
细胞浓度 | 1–2×10¹¹ CFU/mL（浓缩10倍） |
技术突破
创新点 | 效果 |
多步洗涤纯化 | 去除外膜脂多糖，降低电转脉冲阻抗 |
超纯水电渗透 | 瞬时水通道形成，DNA高效摄入 |
高渗恢复培养 | 电转后立即SOC-Mg²⁺高渗恢复，存活率提升3倍 |
无抗生素筛选 | 电转后4小时表达窗口，避免质粒丢失 |
特性 | 说明 |
适用菌株 | Arqua1、ATCC 15834、K599、MSU440等 |
特殊优化 | 针对Ri质粒（pRi）的Vir基因诱导优化 |
诱导化合物 | 含100 μM乙酰丁香酮（AS）预处理模块 |
转化效率 | ≥5×10⁷ CFU/μg（pCAMBIA2301-GFP） |
应用方向 | 药用植物毛状根培养、代谢工程、根系发育研究 |
发根农杆菌转化特色
对比项 | 根癌农杆菌 | 发根农杆菌 |
致瘤质粒 | Ti质粒（tumor-inducing） | Ri质粒（root-inducing） |
T-DNA来源 | 左右边界（LB/RB）之间 | TL-DNA + TR-DNA（双T-DNA） |
植物表型 | 冠瘿瘤（undifferentiated） | 毛状根（hairy root, hormone-free growth） |
应用优势 | 稳定转化、可再生植株 | 快速生长、高代谢物产量、根系特异性表达 |
产品编号 | 菌株背景 | 抗性标记 | 特色应用 |
AI-GV3101 | C58C1 Rifᵣ | Rif⁺, Gent⁺ | 拟南芥转化金标准 |
AI-EHA105 | C58C1 Rifᵣ | Rif⁺ | 单子叶植物高效转化 |
AI-LBA4404 | Ach5 | Rif⁺, Str⁺ | 安全性高（disarmed Ti） |
AI-AGL1 | C58 Rec⁻ | Rif⁺, Carb⁺ | 大片段（>150 kb）转移 |
AI-GV3101(pSoup) | 含pSoup辅助质粒 | Rif⁺, Gent⁺, Tet⁺ | pGreen/pSoup双元系统 |
AI-EHA101 | C58C1 Rifᵣ | Rif⁺, Carb⁺ | 超级Vir突变体 |
质量标准
检测项目 | 合格标准 | 检测方法 |
转化效率 | ≥1×10⁸ CFU/μg（GV3101/EHA105） | 标准质粒转化实验 |
无菌检测 | 无细菌/真菌污染 | LB平板培养48h |
质粒稳定性 | 无辅助质粒丢失 | 选择性平板验证 |
细胞活力 | >90%（台盼蓝染色） | 显微镜计数 |
批次一致性 | CV<15% | 至少3批次验证 |
三、代理公司介绍
农杆菌感受态制备试剂盒代理——北京百奥创新科技有限公司，公司产品线涉及细胞与基因治疗、免疫学、分子生物学、 细胞生物学等多个方向，专注于生命科学试剂、耗材、细胞、仪器等产品销售，经营的品牌主要有：ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam、Elabscience、GeneTex、Gentaur、immunostar、Invitrogen、invivogen、Kerafast、Coriell、ATCC、SSI-DIAGNOSTICA、凯杰、RD systems等等。我们提供质优价美的产品、及时到位的服务，努力成长为生命科学和生物技术企业的优质供应商。
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