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产品简介
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一、代理介绍
mRNA合成试剂盒代理——北京百奥创新科技有限公司,提供多个品牌的mRNA合成试剂盒等产品,更多产品咨询,欢迎联系!
二、产品介绍
HiScribe T7 ARCA mRNA合成试剂盒基于T7 RNA聚合酶体外转录系统,以高产率、高加帽效率及完整修饰体系支持功能性mRNA的标准化制备,适用于疫苗开发、细胞治疗及基因功能研究。
核心酶学组件
重组T7 RNA聚合酶经高密度发酵与多步纯化,比活性>500 U/μg,37°C反应30分钟可合成>150 μg mRNA(1 μg DNA模板)。酶制剂无DNase与RNase污染,转录产物3'端均一性经PAGE验证。反应缓冲液优化NTP比例与镁离子浓度,减少转录流产与dsRNA副产物生成,全长转录本占比>90%。
共转录加帽技术
ARCA(Anti-Reverse Cap Analog)以3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G结构掺入转录起始端,加帽效率>95%,较传统m7GpppG帽结构提升翻译效率2-3倍。共转录加帽避免酶法后修饰步骤,反应体系一步完成转录与加帽,产物5'端帽0结构经HPLC-MS确证。帽类似物与GTP浓度比例优化至4:1,确保起始效率与链延伸平衡。
核苷修饰选项
N1-甲基假尿苷(m1Ψ)或5-甲基胞苷(m5C)修饰NTP套装可选,修饰核苷wan-quan替代天然对应物,降低先天免疫识别并延长体内半衰期。修饰mRNA在树突状细胞中IL-6、TNF-α诱导水平较未修饰品降低>90%,蛋白表达持续时间延长至72-96小时。定制混合修饰比例(如m1Ψ+m5C组合)经文献验证可进一步优化表达效率与免疫原性平衡。
模板设计与兼容性
线性化质粒或PCR产物均可作为模板,T7启动子序列为5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3',转录起始位点+1为G时效率优。试剂盒提供阳性对照模板(EGFP编码序列),反应体系20 μL标准规模可放大至100 μL或毫升级别。poly(A)尾添加支持两种策略:模板编码120-150 nt A尾,或转录后E. coli poly(A)聚合酶加尾,尾长分布CV<15%。
纯化与质量控制
DNase I处理去除模板DNA,磁珠或氯化锂沉淀纯化回收率>80%,A260/A280比值1.9-2.1。完整性经毛细管电泳或生物分析仪评估,完整峰占比>80%为合格标准。内毒素去除方案可选,LAL检测<0.1 EU/μg mRNA满足动物实验与细胞治疗原料要求。冻干制剂经优化保护剂配方,-20°C保存24个月完整性无显著下降。
下游应用验证
体外翻译系统(兔网织红细胞裂解物或小麦胚芽提取物)验证蛋白表达,条带特异性经Western blot确认。细胞水平转染采用脂质体或电穿孔递送,流式细胞术定量表达阳性率。体内表达经荧光素酶报告基因验证,肌肉注射或脂质纳米颗粒静脉给药后6-24小时达表达峰值。
三、代理公司介绍
mRNA合成试剂盒代理——北京百奥创新科技有限公司,提供OriGene蛋白等产品,更多产品咨询,欢迎联系!代理——北京百奥创新科技有限公司,公司产品线涉及细胞与基因治疗、免疫学、分子生物学、 细胞生物学等多个方向,专注于生命科学试剂、耗材、细胞、仪器等产品销售,经营的品牌主要有:ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam、Elabscience、GeneTex、Gentaur、immunostar、Invitrogen、invivogen、Kerafast、Coriell、ATCC、SSI-DIAGNOSTICA、凯杰、RD systems、GoldBio等等。我们提供质优价美的产品、及时到位的服务,努力成长为生命科学和生物技术企业的优质供应商。
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