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2023-1019
在蛋白表达系统的相关研究中,从头合成蛋白质并不是一个可行的选择。因此需要借助活细胞或细胞器用作生产和构建蛋白质的工厂。那么你知道该如何选择蛋白表达系统吗?让我们一起来看看吧!目前,较为主流的表达宿主有大肠杆菌(E.coli)、毕赤酵母(P.pastoris)、昆虫-杆状病毒(Bac-to-Bac系统)以及哺乳动物细胞系(CHO、HEK293)等。一、细菌优点:1.遗传背景清楚;2.繁殖快、成本低、抗污染能力强;3.表达量高、表达产物分离纯化相对简单、稳定性好;4.商品化的载体...
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2023-1018
PCR反应的特点是具有较大扩增能力与灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。那么PCR反应污染原因有哪些?一下来学习一下吧!1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。2、PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中,由于加样枪...
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2023-1018
标准溶液就是已确定其主体物质浓度或其他量值的溶液。不同的情况需使用不同的标准溶液,可千万别一概而论。那么标准溶液配制的注意事项有哪些?一起来学习一下吧!1.分析实验所用的溶液应用纯水配制,容器应用纯水洗涤三次以上,特殊要求的溶液应事先做纯水的空白检验。2.溶液要用带塞的试剂瓶盛装;见光易分解的溶液要装于棕色瓶中;挥发性试剂(如,有机试剂)配制的溶液,瓶塞要严密;见空气易变质及放出腐蚀性气体的溶液也要盖紧,长期存放要用蜡封住;浓碱溶液应用塑料瓶装,如装在玻璃瓶中,要用橡皮塞塞紧...
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2023-1017
在基因测序和核酸检测等生物实验中,引物纯化是关键的步骤之一,它直接影响着实验的准确性和成功与否。那么,引物纯化方式有哪些,如何选择?本文将详细介绍引物纯化的方法。◆脱盐寡核苷酸合成后,为了纯化寡核苷酸成为天然的DNA结构,首先必须去除保护基团。通过浓lv水处理,合成的寡核苷酸从固相载体上分离,2-氰乙氧基--磷酸二脂键的保护基团,以及碱基的保护基团基(苯甲酰基和异丁基)被去除,从而形成了天然的DNA结构。然而,必要的去保护步骤完成后,寡核苷酸混合物还包含几种必须被去除的小分子...
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2023-1017
DNA引物是如何合成的?目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种,无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。亚磷酰胺三酯法合成DNA片段,具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的,合成的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的,相邻的核苷酸通过3′→5′磷酸二酯键连接。第一步是将预先连接在固相载体CPG上的活性基团被保护的核...
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