用Trizol法提取RNA的实验步骤

RNA是目前发现细胞内生物功能丰富多样的生物大分子，同时是DNA与蛋白质信息传递的桥梁，因此完整RNA的提取和纯化是功能基因组时代的重要手段。今天我们一起来了解一下用Trizol法提取RNA的实验步骤。
以提取组织细胞为例：

1.提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5~10⁶个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈震荡以裂解细胞；

2. 将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中，在室温15~30℃下放置5分钟；

3. 在上述EP管中，按照每1ml Trizol后加0.2ml氯fang的量加入氯fang，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15~30℃）放置2~3分钟后，12000g（2~8℃）离心15分钟；

4.去上层水相置于新EP管中，按照每1ml Trizol加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15~30℃）放置10分钟后，12000g（2~8℃）离心10分钟；

5.弃上清，按照每1ml Trizol加1ml 75% 乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2~8℃）离心5分钟，弃上清；

6.让沉淀的RNA在室温在自然干燥；

7.用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。

8.RNA检测

(1) RNA的电泳图谱，电泳的目的是在于检测28S、18S、5S条带的完整性和他们的比值，一般的，如果28S和18S条带明亮、清晰、条带锐利，并且28S的亮度在18S条带的两倍以上，我们认为RNA的质量是好的。

(2) 测定样品在260nm和280nm的吸光值按1OD=40μg/ml RNA计算RNA的产量，一般的OD260/OD280在1.8-2.0范围，我们认为RNA的质量是好的，如果R<1.8，说明溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较明显，如果R>2.2，说明RNA已经水解成单核酸了。

以上就是用Trizol法提取RNA的实验步骤的方法，更多有关于核酸提取的问题请咨询百奥创新客服！