凝胶过滤层析（SEC）的蛋白纯化方法是怎样的呢？

凝胶过滤层析（SEC）的蛋白纯化方法是怎样的呢？

凝胶过滤层析又称为分子筛或排阻层析，是利用蛋白分子大小和形状的不同进行分离。以惰性细颗粒基质作为层析柱填料，由于液体的挤压，大分子物质因无法进入细颗粒的微孔中而随着液体从细颗粒间的缝隙流出，而小分子因进入细颗粒基质内微孔运动速度慢，保留时间长，比大分子物质流出缓慢而分离。凝胶过滤的层析样品不与层析柱料结合，因此，缓冲液成分不直接影响分辨率。

凝胶层析的固定相是凝胶。凝胶是一种不带电荷的具有三维空间多孔网状结构的物质，凝胶的每个颗粒内部都具有很多细微的小孔，如同筛子一样。

特点：

1.通常多用于最后一步纯化的有效方法；

2.整个SEC过程都只使用一种溶剂；

3.低聚物、去折叠的蛋白分子和缺失蛋白都可以在逐渐置换缓冲液的过程中与结构完整的天然蛋白质分子分离开；

4.SEC可使用溶剂种类更多，所用的缓冲盐也更少，比透析的缓冲液置换过程更快更可靠；

5.介质的类型和柱子的长度对蛋白质的SEC分离的分辨率有很大的影响；

6.根据待分离蛋白质分子的分子量和分离条件市场上有很多种排阻范围的介质可选。

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