处理RT-qPCR实验样本的注意事项有哪些？

RT-qPCR是将RNA的反转录和cDNA的聚合酶链式扩增结合起来，并对起始模板进行定量分析的技术。目前RT-qPCR应用领域广泛，在科研端可用于基因表达量分析、病原体检测、RNA干扰验证，同时也是分子体外诊断的行业金标准，例如在临床疾病诊断、动物检验检疫、食品安全和科学研究等应用场景均有涉及，肝炎、艾滋病、流感、登革热、感染性腹泻等的检测、诊断和治疗上发挥着重要作用。那么在实验过程中，我们如何正确处理RT-qPCR实验样本以提取到高质量的RNA是实验成功的关键，处理RT-qPCR实验样本的注意事项有哪些？让我们跟着小编一起来学习一下吧！

一、避免外源RNase影响

外源RNase是导致RNA降解的主要因素。采集和实验环境要尽可能整洁，使用的耗材需要用DEPC处理或购买无酶耗材；同时实验人员操作迅速熟练，使降解时间缩短。

二、避免内源RNase影响

某些富含RNA内源酶的部位 (如脾脏、胸腺) 本身就容易降解，应该在液氮条件下将组织碾碎，且匀浆时使用更多裂解液。

三、根据提取量分装样本

取样前先明确一次提取的组织量，取样后按照一次提取的量分管保存，避免二次分管和并管造成的污染和降解。

四、选择高丰度组织部位

不同组织部位的RNA含量不同，实验中尽量选用高丰度的组织部位，如动物样本的肝脏、心脏的RNA含量可达2-4 μg/mg，植物样本中的叶片、根茎为0.2-0.3 μg/mg。

以上就是处理RT-qPCR实验样本的注意事项介绍，如果您有更多关于RT-qPCR实验的问题，请与百奥创新客服联系！