引物设计要遵循什么原则？

对于刚接触分子生物学实验的小伙伴们来说，如果做一些与基因相关的实验的话，肯定离不开最基础的实验——PCR，目前大家使用PCR技术做的最多的就是对基因/物种的鉴定、基因的克隆、基因表达量测定等实验。今天百奥创新将介绍PCR引物设计要遵循什么原则。
1、引物长度一般在15-30bp。常用的为18-27bp，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应；

2、引物GC含量一般为40%-60%， 45-55%为宜，GC含量过高或过低都不利于引发反应，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近，一般Tm值不超过5℃。

3、引物所对应的模板序列的Tm值在55-80℃之间，最好为72℃左右。

4、引物的延伸是从3′端开始的，不能进行任何修饰，且 3’端的碱基一般不用A；引物3’端出现3个以上的连续碱基，如GGG或CCC，或者引物3’端的互补、二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败，

5、碱基要随机分布，且引物自身和引物之间不能有连续4个碱基的互补。

6、尽量在基因的编码区（CDS序列）上设计引物，限制基因组DNA扩增。

7、使用BLAST检索，确认引物特异性。

以上就是有关于PCR引物设计要遵循什么原则的问题解答，如果你想了解更多请咨询百奥创新客服哦！