引物设计要遵循什么原则？

对于刚接触分子生物学实验的小伙伴们来说，如果做一些与基因相关的实验的话，肯定离不开最基础的实验——PCR，目前大家使用PCR技术做的最多的就是对基因/物种的鉴定、基因的克隆、基因表达量测定等实验。今天百奥创新将介绍PCR引物设计要遵循什么原则。1、引物长度一般在15-30bp。常用的为18-27bp，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于TaqDNA聚合酶进行反应；2、引物GC含量一般为40%-60%，45-55%为宜，GC含量过高或过低都不利于引发反应，上下游引物GC含...

查看更多

PCR反应准备工作要怎么做呢?

PCR全称多聚酶链式反应（polymerasechainreaction），是一种非常强大的技术，可以通过一种非常简单但是高效的方法来复制DNA，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。那PCR反应准备工作要怎么做呢?1.PCR反应体系1.10×扩增缓冲液10μl2.4种dNTP混合物（终浓度）各100～250μmol/L3.引物（终浓度）各5～20μmol/L4.模板DNA0.1～2μg5.TaqDNA聚合酶5～10U6.Mg2+（终...

查看更多

常见的细胞消化方法有哪些？

我们在细胞培养时大部会以贴壁的形式生长（除了取自血、脾或骨髓的细胞），使用的wan全培养基中的血清，含有许多带阳性电荷的促细胞附着因子（层黏连蛋白Laminine、纤维链接蛋白Fibronectin等胞外基质），能帮助细胞附着于带阴性电荷的底物上，并形成键结、贴壁伸展。也就是所谓的细胞消化，常见的细胞消化方法有哪些？一起来学习一下吧！机械消化法直接用液体吹打或用刮刀，施予外力让细胞与培养底物分离；适用于贴壁性弱的细胞传代，但相较于其它消化方法，这种外力无法量化控制，细胞分散效...

查看更多

如何选择合适的流式抗体呢？

流式细胞术是一种在液流系统中，快速测定单个细胞或细胞器的生物学性质，并把特定的细胞或细胞器从群体中加以分类收集的技术。在细胞生物学、细胞凋亡研究和免疫学方面起着非常重要的作用。随着流式细胞术在不断发展，流式抗体及荧光标记产品的种类、数量也在不断增多，加上多色分析实验方案需求的增长，逐渐产生了抗体难选择、荧光难搭配等问题。那么如何选择合适的流式抗体呢？1、抗体的选择流式抗体本身也是抗体，所以选择流式抗体一定要满足抗体选择最基本的条件：目标蛋白特异性，反应种属以及应用实验。（1）...

查看更多

免疫组化非特异性染色的原因及避免方法有哪些呢？

免疫组织化学技术是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，对组织或细胞内抗原或抗体物质定性和定位的组织化学技术。组织的非特异性染色的机理很复杂,所以控制非特异性背景染色也不容易,非特异性染色的识别常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处，坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性，均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。免疫组化非特异性染色的原因及避免方法有哪些呢？一起来学习一下吧！1.静电吸附抗体是一种带负电荷的球蛋白，容易和带正电荷的组织相结合。在用第一...

查看更多