外泌体纯化方法有哪些以及其优缺点

外泌体研究自过去二十年以来一直是焦点领域。人体内多种细胞在正常以及病理状态下均可分泌外泌体，如间充质干细胞、内皮细胞、肿瘤细胞、骨髓细胞、免疫细胞等。外泌体与干细胞有着类似的功能，在组织工程与再生医学方面的临床前期研究，尤其是干细胞外泌体。那么一起来学习一下外泌体纯化方法有哪些以及其优缺点吧！1.超速离心法是常用的外泌体纯化手段，也是普遍认可的一种方式，采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。优点：无需特殊试剂，操作简便，适合大批量样本。缺点：耗时耗力，纯...

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大肠杆菌感受态细胞制备及转化中的影响因素有哪些？

大肠杆菌，是一种伴随我们终生的细菌，也是生物实验常用的模式生物。通过感受态细胞的制备和宿主细胞的转化等操作实现基因工程改造，大肠杆菌便成为基因工程菌，并造福人类。本期跟随百奥创新的脚步，让我们一起来了解大肠杆菌感受态细胞制备及转化中的影响因素有哪些？1.细胞的生长状态和密度最好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳。即应用对数期或对数生长前期的细菌可通过测定培养液的OD600控制。对TG...

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免疫共沉淀的实验流程是怎样的呢？

WhatisCo-IP？Co-IP全称Co-Immunoprecipitation，中文学名免疫共沉淀，是一种以抗体和抗原识别专一性为基础，用于研究蛋白质之间相互作用的经典方法。通俗点来说，假设我们需要研究样品中A蛋白和B蛋白之间是否存在一些相互作用，首先我们通过合适的方法处理样本，将蛋白提取出来（同时不能破坏蛋白之间的相互作用），然后用预先结合了琼脂糖珠或者磁珠的A蛋白抗体捕获样本中的A蛋白，那么与A蛋白结合的B蛋白也能一起沉淀下来。再将蛋白从珠子上裂解下来，对B蛋白进行检...

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引物设计要遵循什么原则？

对于刚接触分子生物学实验的小伙伴们来说，如果做一些与基因相关的实验的话，肯定离不开最基础的实验——PCR，目前大家使用PCR技术做的最多的就是对基因/物种的鉴定、基因的克隆、基因表达量测定等实验。今天百奥创新将介绍PCR引物设计要遵循什么原则。1、引物长度一般在15-30bp。常用的为18-27bp，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于TaqDNA聚合酶进行反应；2、引物GC含量一般为40%-60%，45-55%为宜，GC含量过高或过低都不利于引发反应，上下游引物GC含...

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PCR反应准备工作要怎么做呢?

PCR全称多聚酶链式反应（polymerasechainreaction），是一种非常强大的技术，可以通过一种非常简单但是高效的方法来复制DNA，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。那PCR反应准备工作要怎么做呢?1.PCR反应体系1.10×扩增缓冲液10μl2.4种dNTP混合物（终浓度）各100～250μmol/L3.引物（终浓度）各5～20μmol/L4.模板DNA0.1～2μg5.TaqDNA聚合酶5～10U6.Mg2+（终...

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