NK细胞培养注意要点有哪些？

自然杀伤（NK）作为免疫细胞治疗技术中具有代表性的细胞之一，于1975年被学者Kiessling发现并命名,其起源于骨髓中的淋巴前体细胞，并在发育成熟后广泛分布于外周血、骨髓、淋巴结、脾脏、肺和肝脏中。NK细胞是天然免疫系统的重要组成的一部分，它来源于CD34+造血干细胞，因其可以在没有抗原预敏的条件下以主要组织相容性复合体（majorhistocompatibilitycomplex,MHC）非限制性方式快速杀伤靶细胞而成为免疫治疗的研究热点。原代NK细胞是一种比较难培养的...

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蛋白Marker有哪些分类？

蛋白Marker是蛋白分子量标准，是一些已知分子量的蛋白质的混合物，像“尺子”一样用来指示蛋白质条带的大小。Marker的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小，只有标准量精确无误了，实验结果才有说服力，因此选择正确的蛋白Marker也是WB实验成功的必要条件之一。那么你知道蛋白Marker有哪些分类吗？总体来说目比较常用的蛋白Marker分为非预染蛋白Marker和预染蛋白Marker。非预染蛋白Marker是几种已知分子量并纯化好的蛋白质预混液，方便不同大小的蛋白进...

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处理RT-qPCR实验样本的注意事项有哪些？

RT-qPCR是将RNA的反转录和cDNA的聚合酶链式扩增结合起来，并对起始模板进行定量分析的技术。目前RT-qPCR应用领域广泛，在科研端可用于基因表达量分析、病原体检测、RNA干扰验证，同时也是分子体外诊断的行业金标准，例如在临床疾病诊断、动物检验检疫、食品安全和科学研究等应用场景均有涉及，肝炎、艾滋病、流感、登革热、感染性腹泻等的检测、诊断和治疗上发挥着重要作用。那么在实验过程中，我们如何正确处理RT-qPCR实验样本以提取到高质量的RNA是实验成功的关键，处理RT-q...

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凝胶过滤层析（SEC）的蛋白纯化方法是怎样的呢？

凝胶过滤层析（SEC）的蛋白纯化方法是怎样的呢？凝胶过滤层析又称为分子筛或排阻层析，是利用蛋白分子大小和形状的不同进行分离。以惰性细颗粒基质作为层析柱填料，由于液体的挤压，大分子物质因无法进入细颗粒的微孔中而随着液体从细颗粒间的缝隙流出，而小分子因进入细颗粒基质内微孔运动速度慢，保留时间长，比大分子物质流出缓慢而分离。凝胶过滤的层析样品不与层析柱料结合，因此，缓冲液成分不直接影响分辨率。凝胶层析的固定相是凝胶。凝胶是一种不带电荷的具有三维空间多孔网状结构的物质，凝胶的每个颗粒...

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用Trizol法提取RNA的实验步骤

RNA是目前发现细胞内生物功能丰富多样的生物大分子，同时是DNA与蛋白质信息传递的桥梁，因此完整RNA的提取和纯化是功能基因组时代的重要手段。今天我们一起来了解一下用Trizol法提取RNA的实验步骤。以提取组织细胞为例：1.提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5~106个细胞加1mlTrizol后，反复用枪吹打或剧烈震荡以裂解细胞；2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中，在室温15~30℃下放置5分钟；3.在上述EP管中，按照每1mlTrizol后加0.2ml...

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